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生物緩沖液TRIS(77-86-1)在植物蛋白質(zhì)提取中的應用

2022年09月09日舉報編輯打印
生物緩沖液TRIS(77-86-1)在植物蛋白質(zhì)提取中的應用
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關鍵詞:
TRIS  
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 Tris中文品名為三羥甲基氨基甲烷,CAS77-86-1。是一種白色結(jié)晶或粉末。溶于乙醇和水,微溶于乙酸乙酯、苯,不溶于乙醚、四氯化碳,對銅、鋁有腐蝕作用,有刺激性的化學物質(zhì)。

   蛋白質(zhì)組學即從蛋白質(zhì)組的水平進一步認識生命活動的機理和疾病發(fā)生的分子機制,而在蛋白質(zhì)組學的研究中,蛋白質(zhì)的提取是**基礎也**關鍵的環(huán)節(jié)之一,Tris是植物蛋白質(zhì)提取中常用的試劑,方法包括Tris-HCl法、酚法、Tris-丙酮-酚法。本文將對這幾種方法進行分析總結(jié)。

1.Tris-HCl法

Tris-HCl法提取的蛋白圖譜效果比用TCA丙酮法提取的效果好。TCA丙酮法所提取蛋白在小分子量區(qū)域分布不均勻,蛋白點不清晰,水平條紋與豎直條紋較為嚴重,而Tris-HCl法克服了上述缺點,并分離出TCA丙酮法所不易分離出的酸性蛋白,除分離到較多的中等分子量的蛋白質(zhì)外,還能得到很多的高分子量和低分子量蛋白質(zhì)。

 Tris-HCl法操作簡便,時間較短成本適中等優(yōu)勢,提取步驟簡單,蛋白質(zhì)損失少,實驗結(jié)果重復性好。

2.酚法

酚法利用了Tris-飽和酚的特性:酚是蛋白質(zhì)的良好溶劑,在樣品制備過程中,蛋白質(zhì)和脂類溶于酚相,鹽、核酸、多酚和多糖等可溶性物質(zhì)進入水相;通過增加離心力和離心時間,可以盡可能地把密度大的糖離至上清液的上層;酚相中的蛋白質(zhì)通過乙酸銨的甲醇溶液沉淀,再用冷丙酮多次清洗蛋白,可以去除色素和銨離子等雜質(zhì)。

該方法在處理含有大量干擾物質(zhì)的植物樣品中非常有效,但這種方法相對復雜,耗時長。

3.Tris-丙酮-酚法

將TCA丙酮法與酚法結(jié)合后用于提取蛋白,融合了TCA丙酮沉淀法和酚法的優(yōu)點。先用含有乙酸銨的甲醇溶液清洗殘留的TCA并提升溶液的pH到7.0以上,再使用酚和SDS的混合物來溶解蛋白。酚-SDS聯(lián)合提取比酚、SDS緩沖液單獨提取更有效。Tris-丙酮-酚法在很多植物的蛋白提取上都取得了非常好的效果,而且電泳圖譜背景和條帶都很清晰,蛋白質(zhì)點多,可廣泛應用于植物的葉片和果實中蛋白質(zhì)的提取。

該提取方法非常省時,提取的總時間在1h左右,大大縮短了傳統(tǒng)方法提取蛋白所需的時間。

對于植物蛋白的提取,不僅樣品多樣,而且每種植物所含有的成分也不同,其中的干擾因素也多,所以沒有一種方法可以適用于各種樣品。在實驗中,**先要明確目的,是獲得一種目標蛋白還是獲得所有蛋白,然后再根據(jù)樣品特點來選擇提取方法,進行摸索優(yōu)化。

上述講述TRIS在植物蛋白提取中的應用,除此之外TRIS(三羥甲基氨基甲烷)還有許多用途。可用于磷霉素的**,亦可作硫化促進劑、化妝品(霜劑、洗劑)、礦物油、石蠟乳化劑。還可用作酸性氣體吸收劑,配制緩沖液、表面活性劑、乳化劑和促進劑。德晟研發(fā)銷售TRIS有15年經(jīng)驗,擁有成熟的研發(fā)團隊,對TRIS有較深的研究,可為客戶解決技術問題,有需求的可來電咨詢。

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